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ELISA試劑盒雙抗體夾心法是查看抗原zui常用的方法，操作過程如下：
將特異性抗體與固相載體聯(lián)合，構(gòu)成固相抗體。
洗刷除去別的未聯(lián)絡(luò)物質(zhì)。
加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體聯(lián)絡(luò)。
洗刷除去未聯(lián)絡(luò)的抗體及雜質(zhì)。
加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體聯(lián)絡(luò)，構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物。
*洗刷未聯(lián)絡(luò)的酶標(biāo)抗體。
此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量有關(guān)。
抗體的來歷為抗血清，包被和酶標(biāo)用的抗體分別取自不一樣種屬的動物。
如運(yùn)用單克隆抗體，一般挑選兩個關(guān)于抗原上不一樣抉擇簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶聯(lián)絡(luò)物。
類同于堆積反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，此時反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過剩帶上），如按常法測讀，所得效果將低于實踐的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect），由于標(biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)后呈鉤狀彎落。
ELISA試劑盒雙抗體夾心法鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時，反應(yīng)乃至可不顯色而出現(xiàn)假陰性效果。
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能構(gòu)成兩位點夾心。
在臨床查驗中，此法適用于查驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。
只需獲得關(guān)于受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶聯(lián)絡(luò)物而樹立此法。
在一步法測定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體聯(lián)絡(luò)，而不再構(gòu)成"夾心復(fù)合物"。
運(yùn)用一步法試劑測定標(biāo)本中含量可反常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應(yīng)留心可測規(guī)模的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
假使在被測分子的不一樣位點上富含多個一樣的抉擇簇，例如HBsAg的a抉擇簇，也可用關(guān)于此抉擇的同一單抗分別包被固相和制備酶聯(lián)絡(luò)物。
但在HBsAg的查看中應(yīng)留心亞型疑問，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有一樣的a抉擇簇的反應(yīng)性，這也是用單抗作夾心法應(yīng)留心的疑問。
ELISA試劑盒雙抗體夾心法測抗原的另一留心點是類風(fēng)濕因子（RF）的煩擾。
RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段聯(lián)絡(luò)。
用作雙抗體夾心法查看的血清標(biāo)本中如富含RF，它可充任抗原成份，一起與固相抗體和酶標(biāo)抗體聯(lián)絡(luò)，表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。
選用F（ab'）或Fab片段作酶聯(lián)絡(luò)物的試劑，由于去除了Fc段，然后消除RF的煩擾。
ELISA試劑盒雙抗體夾心法本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不一樣，尋覓適合的符號方法。